CCK-8試劑做實驗時有哪些需要注意的事項

更新時間：2021-01-25

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　　今天我給大家說說用CCK-8試劑做實驗時的注意事項：

　　1.第一次做實驗時，建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。

　　2.接種時注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致。

　　3.培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。

　　4.建議采用多通道移液器，減少平行孔間的誤差，加CCK-8時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡，干擾OD值。

　　5.若細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或pH發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加CCK-8，含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測定。

　　6.CCK-8對細(xì)胞的毒性非常低，其他的實驗，例如中性紅法或結(jié)晶紫法，也可在CCK-8法檢測完后繼續(xù)進行。

　　7.可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定，CCK-8在參比波長處沒有吸光值，設(shè)定參比波長的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收。

　　8.如果實驗中待測物質(zhì)有氧化還原劑，在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入CCK-8試劑在一定時間內(nèi)檢測，和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較(只加CCK-8試劑)，如果OD值明顯偏高，則說明有反應(yīng)。

　　9.加CCK-8試劑時速度要快，減少試劑在移液器上的殘留，加入CCK-8試劑后輕輕震培養(yǎng)板，為了避免加樣時由于CCK-8殘留在槍頭上所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。

　　10.CCK-8反復(fù)凍融會增加背景值，干擾實驗測定。

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