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你知道如何降低ELISA試劑盒操作的布景噪音嗎?

更新時(shí)間:2021-04-25點(diǎn)擊次數(shù):865
  在ELISA試劑盒操作中,咱們都認(rèn)為ELISA試驗(yàn)的原理好像很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗刷和關(guān)閉。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗刷和關(guān)閉,假如做得不太好,也有或許毀了整個(gè)試驗(yàn)。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí),咱們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會(huì)影響您對(duì)成果的判斷。今天小編怎么教你降低ELISA試劑盒操作的布景噪音。
 
  一、洗刷很重要:洗刷步驟看似很無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)榧偃缥唇Y(jié)合的資料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)添加布景噪音。如有必要,可添加洗刷液中的鹽濃度,這會(huì)阻撓非特異結(jié)合反應(yīng)。假如布景過(guò)高,而您置疑洗刷不夠時(shí),可以測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
 
  二、關(guān)閉更關(guān)鍵:關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也期望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。假如您的布景過(guò)高,置疑關(guān)閉不充分,那么您可以測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液,或適當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)間。
 
  三、抗體濃度須優(yōu)化:咱們通常會(huì)follow師兄師姐留下來(lái)的操作步驟,但是假如試劑稍有不同,則或許需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了避免這一點(diǎn),切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。
 
  四、檢測(cè)試劑要適量:另一點(diǎn)也很清楚明了:切勿運(yùn)用過(guò)多的檢測(cè)試劑。假如濃度過(guò)高,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
 
  假如您的ELISA試劑盒操作中不幸地遇到了高布景,那么也無(wú)需太憂慮,順次檢查ELISA體系中的組分,并排除或許存在的問(wèn)題。盡心優(yōu)化,相信很快就會(huì)有美麗的成果。

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