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總巰基含量檢測(cè)試劑盒

生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì)，而且參與活性氧清除，后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和 GSH 含量，能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。

巰基基團(tuán)與 5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有吸收峰。

總巰基含量檢測(cè)試劑盒

樣品的制備：

1. 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 血清，培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

操作步驟：

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 412nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表對(duì)照管 測(cè)定管樣品（μL） 40 40 試劑一（μL） 150 150 試劑二（μL） 10 H2O（μL） 10 混勻，25℃靜置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板，測(cè)定 412nm 吸光值。ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.7236 x，R 2 = 0.9994

1. 組織：

（1）按樣本重量計(jì)算總巰基含量（μmol/g）= 1.7236 ?A ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）= 2.9×ΔA÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算總巰基含量（μmol/mg prot）= 1.7236 ?A ×V 反總÷(V 樣×Cpr) = 2.9×ΔA÷Cpr

2. 血清、培養(yǎng)液：

總巰基含量（μmol/L）= 1.7236 ?A ×V 反總÷V 樣×103 =2900×ΔA V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積， 1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；103 ：1mmol/L=103 μmol/ L

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8618x，R 2 = 0.9994 1.

組織：（1）按樣本重量計(jì)算總巰基含量（μmol/g）= 0.8618 ?A ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）=5.8×ΔA÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算總巰基含量（μmol/mg prot）= 0.8618 ?A ×V 反總÷（V 樣×Cpr）=5.8×ΔA÷Cpr

2. 血清、培養(yǎng)液：總巰基含量（μmol/L）= 0.8618 ?A ×V 反總÷V 樣×103 =5800×ΔA V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積， 1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；103 ：1mmol/ L=103 μmol/ L