產(chǎn)品名稱:：  乙酰膽堿酯酶(AchE)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名:  Acetylcholinesterase(AchE) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC2020              產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣            產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：180
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:  乙酰膽堿酯酶檢測(cè)試劑盒|AchE檢測(cè)試劑盒|乙酰膽堿酯酶|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹：
AchE是一種絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。在神經(jīng)突觸間隙中AchE通過(guò)催化水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（Ach）來(lái)維持神經(jīng)沖動(dòng)的正常傳遞，在生物神經(jīng)傳導(dǎo)中起重要作用。
    AchE催化Ach生成膽堿，膽堿與二硫?qū)ο趸鵥en甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基ben甲酸（TNB），TNB在412nm處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定TNB的生成量，即可計(jì)算出AchE的活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體55mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5.2mL試劑一，充分震蕩溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5.2mL試劑一，充分震蕩溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水溶解備用。
產(chǎn)品說(shuō)明：
乙酰膽堿酯酶（AchE）屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿（Ach）水解，在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
AchE催化Ach水解生成膽堿，膽堿與二硫?qū)ο趸鵥en甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基ben甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定412 nm吸光度增加速率，計(jì)算AchE活性。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿，研缽/勻漿器，蒸餾水。
操作步驟：

• 粗酶液提取：
• 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清液待測(cè)。
• 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
• 血清等液體：直接測(cè)定。
• 測(cè)定操作：
• 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
• 操作表：

• AchE活性計(jì)算公式：
• 組織AchE活性
• 按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個(gè)酶活單位。
AchE酶活(U/mg prot)= [ΔA÷ε÷d×V顯色×10⁹] ÷（Cpr ×V樣×V上清÷V酶促）÷T
                   = 2255×ΔA ÷Cpr。

1. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個(gè)酶活單位。
AchE酶活(U/g鮮重)= [ΔA÷ε÷d×V顯色×10⁹]÷（W ×V樣÷V樣總×V上清÷V酶促）÷T
                  = 2255×ΔA÷W。

1. 細(xì)菌、細(xì)胞AchE活性

活性單位定義：每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個(gè)酶活單位。
AchE酶活(U/10⁴ cell)= [ΔA÷ε÷d×V顯色×10⁹]÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總×V上清÷V酶促）÷T
= 2255×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

1. 血清AchE活性

活性單位定義：每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個(gè)酶活單位。
AchE酶活(U/mL)= [ΔA÷ε÷d×V顯色×10⁹]÷（V樣×V上清÷V酶促）÷T =2255×ΔA
ε：TNB摩爾消光系數(shù)，13.6×10³ L/mol/cm；V顯色：顯色反應(yīng)體系總體積（L），1 mL=0.001 L；10⁹：1mol=1×10⁹nmol；V酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.23mL；V上清：吸取上清液體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入樣本體積（mL），0.03 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5min；細(xì)胞數(shù)量：提取時(shí)的細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)個(gè)。
注意事項(xiàng)：
1.測(cè)定過(guò)程中樣本和工作液在冰上放置，以免變性和失活。
2.當(dāng)吸光值大于1時(shí)，建議將樣本稀釋后測(cè)定。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han，Yemeng Yang，Jinglin Gao，Dongxiang Zhao，Chengcai Ren，Shijie Wang，Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影響因子:2.46 PMID:30874992
《Neuroprotective effects of cordycepin inhibit Aβ-induced apoptosis in hippocampal neurons》 作者:Hao Song,Li-Ping Huang,Yuping Li,Chao Liu,Songhua Wang,Wei Meng,Shanshan Wei,Xin-Ping Liu,Yanchun Gong,Li-Hua Yao 期刊:NeuroToxicology 影響因子:3.263 PMID:30031108
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu  期刊:Scientific Reports 影響因子:4.011 PMID:29535326

 

乙酰膽堿酯酶(AchE)活性檢測(cè)試劑盒