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產(chǎn)品名稱(chēng):羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):BC0255

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

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BC0255羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料:

羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng): 羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào):BC0250             產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣          產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價(jià)格:420
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字: 羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒|HYP檢測(cè)試劑盒|羥脯氨酸|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹:
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
    樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP,進(jìn)一補(bǔ)被氯胺T氧化,氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基ben甲醛反應(yīng),產(chǎn)生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣品水解液560nm吸光值,可計(jì)算HYP含量。


產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:6mol/L鹽酸,自備。濃鹽酸:H2OV/V= 1:1,室溫保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
    標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,0.5mg/mL 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明:
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP,進(jìn)一步被氯胺T氧化,氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基ben甲醛反應(yīng),產(chǎn)生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣品水解液560nm吸光值,可計(jì)算HYP含量。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
天平、烘箱、玻璃管、離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
操作步驟:
一、羥脯氨酸提取
1. 組織:稱(chēng)取約0.5g樣品于玻璃管,將組織盡量剪碎以便消化,蓋子稍松不密閉。加入5mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小時(shí)消化沒(méi)有可見(jiàn)大的團(tuán)塊,16000rpm25℃,離心20min(若離心后仍有雜質(zhì),可通過(guò)過(guò)濾去除),10mol/LNaOH(約3mL)調(diào)節(jié)pH值6~8范圍內(nèi)。蒸餾水定容8mL,取上清待測(cè)。(過(guò)程中可能有黑色物質(zhì)生成,若長(zhǎng)時(shí)間不能消化,可能為碳化的物質(zhì))
2. 細(xì)胞:取500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小時(shí)消化透明狀,16000rpm25℃,離心20min,用10mol/LNaOH(約0.5mL)調(diào)節(jié)pH值6~8范圍內(nèi)。蒸餾水定容2mL,取上清待測(cè)。
二、測(cè)定操作:

  1. 將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
  2. 按下表進(jìn)行操作:

 

 對(duì)照管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管
樣本(μL 200 
標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL  200
試劑一(μL200200200
混勻,室溫靜置20min
試劑二(μL200200200
H2OμL600400400
混勻,60℃,20min,取出后室溫靜置15 min,1mL比色皿,在560nm下分別測(cè)定對(duì)照管,測(cè)定管,標(biāo)準(zhǔn)管的OD值,并記為A對(duì)照管A測(cè)定管,A標(biāo)準(zhǔn)管。


三、羥脯氨酸含量計(jì)算公式

  1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,?A標(biāo)準(zhǔn)(?A =A標(biāo)準(zhǔn)管-A對(duì)照管)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到方程y=kx+b。將?A測(cè)定?A =A測(cè)定管-A對(duì)照管)帶入方程得到x。

  1. 羥脯氨酸含量的測(cè)定:

1)按樣本鮮重計(jì)算:
組織羥脯氨酸含量(µg/g 鮮重)= x×V樣品÷W×V樣品÷V組提)=8x÷W。
2)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
組織羥脯氨酸含量(µg/mg prot= x×V樣品÷Cpr×V樣品)=x÷Cpr
3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
細(xì)胞羥脯氨酸含量(µg/104 cell= x×V樣品÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣品÷V胞提)=2x÷細(xì)胞數(shù)量。
V樣品:加入的樣品體積,0.2mL;V組提:組織提取液體積,8mLV胞提:細(xì)胞提取液體積,2mL;W:樣本鮮重;細(xì)胞數(shù)量:以104計(jì);Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL
注意事項(xiàng)

  1. OD值大于1,樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定,注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
  2. 試劑有一定的毒性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施,防止吸入或與皮膚接觸。

     3、按樣本蛋白濃度計(jì)算時(shí),需單獨(dú)提取樣本中的蛋白質(zhì)并測(cè)定。

 相關(guān)文獻(xiàn):

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影響因子: PMID:30644571

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